روش های زیادی برای اندازه گیری رشد باکتری ها وجود دارد ، و یک راه پیچیده تر از دیگری است. اگرچه گاهی اوقات باید قوام اندازه گیری را نادیده گرفت ، اما ساده ترین راه برای اندازه گیری دقیق رشد باکتری ها کافی است ، بنابراین اغلب مورد استفاده قرار می گیرد. متداول ترین روشها پایش و شمارش باکتریها ، اندازه گیری جرم خشک یا مرطوب و اندازه گیری میزان کدورت/کدورت است. آزمایشگاه مدرسه شما باید ابزار و تجهیزات مورد نیاز برای انجام حداقل یکی از این آزمایش ها را داشته باشد.
گام
روش 1 از 3: نظارت مستقیم بر باکتری ها
مرحله 1. مواد را آماده کنید
بسیاری از ابزارهای خاص وجود دارد که باید آماده شوند و ممکن است در آزمایشگاه زیست شناسی موجود نباشند. قبل از اجرای آزمایش ، تمام تجهیزات و ظروف را آماده کنید تا در طول فرآیند هیچ مشکلی ایجاد نشود. شما باید هر ماده ای که بلافاصله استفاده می شود و اصول اولیه این آزمایش را بشناسید.
- اتاق شمارش را آماده کنید. دارای محفظه داخلی ، شیشه میکروسکوپ و میکروسکوپ است بنابراین راه اندازی و استفاده از آن آسان است. می توانید آن را از آزمایشگاه یا فروشگاه لوازم مدرسه خریداری کنید. این ابزار باید دارای دستورالعمل هایی باشد که شما را در تمام مراحل راهنمایی می کند.
- یک فنجان ریختن یا فنجان پهن آماده کنید. هر دوی این ظروف به شما امکان می دهد باکتری های داخل آن را زیر نظر بگیرید.
- فرهنگ اصطلاحی است که برای توصیف رشد موجودات زنده در آزمایش استفاده می شود.
- آبگوشت یک محیط مایع است که در آن فرهنگ رشد می کند.
مرحله 2. از ورق ریختن یا روش ورق پهن استفاده کنید
همچنین می توانید باکتری ها را مستقیماً روی ظرف قرار دهید تا با استفاده از میکروسکوپ مشاهده شوند. فرهنگ را روی یک بشقاب بریزید و آن را زیر میکروسکوپ قرار دهید. تعداد سلولهای باکتریایی موجود را کنترل کنید.
مرحله 3. مطمئن شوید دوز غلظت مناسب است
اگر تعداد آنها زیاد باشد ، باکتری ها روی هم جمع می شوند و ممکن است محاسبه اشتباه کنید. با مخلوط کردن آبگوشت بیشتر ، فرهنگ را رقیق کنید. اگر تعداد آنها بسیار کم باشد ، نتایج محاسبه دقیق نخواهد بود. آبگوشت را با استفاده از سیستم فیلتراسیون صاف کنید.
مرحله 4. باکتری ها را بشمارید
آخرین مرحله شمارش باکتری ها یک به یک است. از طریق لنز ذره بین در محاسبه شمارش را بررسی کرده و تعداد باکتری هایی را که مشاهده می کنید بنویسید. نتایج را با نتایج سایر آزمایشات مقایسه کنید.
روش 2 از 3: اندازه گیری توده خشک و مرطوب
مرحله 1. مطمئن شوید که تجهیزات مناسب را دارید
این روش از تجهیزات گران قیمت و زمان زیادی استفاده می کند. اگر آزمایشگاه شما تجهیزات مورد نیاز خود را ندارد ، بهتر است از روش دیگری استفاده کنید. با این حال ، اگر آزمایشگاه شما به اندازه کافی مجهز است ، این روش را توصیه می کنیم زیرا نتایج سازگارتری را ارائه می دهد. در این روش ، شما نیاز دارید:
- کوره همرفت هیدرولیکی گرانش
- ظرف توزین آلومینیومی
- مجموعه ای از فلاسک ها (بطری های آزمایشگاهی)
- دستگاه گریز از مرکز (سانتریفیوژ) یا سیستم فیلتراسیون آزمایشگاهی
مرحله 2. مطمئن شوید که فرهنگ در فلاسک است
فرهنگ را به کدو تنبل اضافه کنید. در این مرحله ، فرهنگ باید آبگوشت باشد ، اگرچه بعداً دوباره جدا می شود.
مرحله 3. ظرف توزین آلومینیومی را در فر آزمایشگاه خشک کنید
در عوض ، می توانید از غشای فیلتر استات سلولز با قطر 47 میلی متر و اندازه حفره 0.45 میکرومتر استفاده کنید. از هر ظرف توزین استفاده کنید ، آن را وزن کنید زیرا بعداً هنگام سنجش سلول های باکتری باید از آن جدا شود.
مرحله 4. فرهنگ را در فلاسک هم بزنید تا یکنواخت مخلوط شود
سلول به طور طبیعی در اثر جاذبه فرو می رود و باید هم زده شود تا به طور مساوی در فلاسک پخش شود. به این ترتیب ، می توانید نمونه های بیشتری داشته باشید.
مرحله 5. از سانتریفیوژ برای جدا کردن سلولهای باکتری از آبگوشت استفاده کنید
این ابزار فلاسک را می چرخاند و به سرعت متعادل می شود به طوری که آبگوشت را تخلیه می کند و فرهنگ را در فلاسک می گذارد.
مرحله 6. خمیر را روی کدو تنبل کرده و در یک ظرف توزین قرار دهید
آبگوشت را دور بیندازید زیرا دیگر به آن احتیاج ندارید. با این حال ، هنوز کدو را از بین نبرید زیرا هنوز مورد استفاده قرار می گیرد.
مرحله 7. دستگاه گریز از مرکز را بشویید و آب شستشو را درون ظرف بریزید
آب شستشو را در فلاسک روی سلولهای باکتری بریزید تا وزن مرطوب حاصل شود.
مرحله 8. وزن خشک را پیدا کنید
برای اندازه گیری وزن خشک ، ظرف را در فر قرار دهید و طبق دستورالعمل های کوره و/یا ظرف توزین مورد استفاده ، به مدت 6 تا 24 ساعت در دمای 100 درجه سانتی گراد خشک کنید. اطمینان حاصل کنید که درجه حرارت زیاد نیست تا باکتری ها نسوزند. پس از اتمام کار باکتری ها را وزن کنید و فراموش نکنید که نتیجه را با وزن ظرف توزین کاهش دهید.
روش 3 از 3: اندازه گیری کدورت
مرحله 1. تجهیزات لازم را آماده کنید
شما به منبع نور و دستگاه اسپکتروفتومتر احتیاج دارید. هر دو را می توان در فروشگاههای لوازم آزمایشگاهی تهیه کرد. دستگاه اسپکتروفتومتر باید دستورالعمل هایی داشته باشد که شما را در استفاده از دستگاه مطابق مدلی که دارید راهنمایی کند. قیمت دستگاه اسپکتروفتومتر بسیار مقرون به صرفه و آسان برای استفاده است به طوری که ممکن است به یکی از متداول ترین روشهای اندازه گیری رشد باکتری ها تبدیل شود.
مرحله 2. نمونه را روشن کنید
بر اساس اصطلاح لیمن ، کدورت میزان کدورت یک نمونه است. شما باید عدد اندازه گیری کدورت را که در NTU (واحد کدورت نفلومتری) اندازه گیری می شود دریافت کنید. این ابزار قبل از اندازه گیری دقیق نمونه باید کالیبره شود.
مرحله 3. نتایج را ثبت کنید
کدورت تحت تأثیر تعداد باکتری های نمونه قرار می گیرد. دستگاه اسپکتروفتومتر درصد انتقال (٪ T) را نیز به شما می گوید. در صورت کاهش کدورت ، این رقم افزایش می یابد. نتایج را با نتایج آزمایش های دیگر برای اندازه گیری رشد باکتری مقایسه کنید.
هشدار
- از آنجا که شما با کلونی باکتریایی روبرو هستید ، با پوشیدن تجهیزات ایمنی مانند عینک و دستکش ایمنی اقدامات احتیاطی را انجام دهید. همچنین استفاده از ماسک ایده خوبی است ، به خصوص اگر نوع باکتری های مورد مطالعه را نمی دانید.
- قبل از برخورد با هر نوع باکتری ، حتی نوع بی ضرر ، اقدامات احتیاطی را انجام دهید. قبل از شروع ، مطمئن شوید که تمام زخم های باز روی بدن شما کاملاً پوشانده شده است.
