در شیمی ، رقیق سازی فرآیند کاهش غلظت یک ماده در محلول است. رقت زنجیره ای رقیق شدن مکرر محلول برای افزایش سریع ضریب رقت است. این روش معمولاً در آزمایش هایی انجام می شود که نیاز به محلول های بسیار رقیق با دقت بالا دارند. به عنوان مثال آزمایش هایی که شامل منحنی های غلظت در مقیاس لگاریتمی هستند یا آزمایشاتی برای تعیین چگالی باکتری ها. رقیق سازی زنجیره ای به طور گسترده ای در آزمایش های علمی مانند بیوشیمی ، میکروبیولوژی ، داروسازی و فیزیک مورد استفاده قرار می گیرد.
گام
روش 1 از 2: انجام رقیق سازی اولیه
مرحله 1. محلول رقیق کننده مناسب را تعیین کنید
تعیین مایعی که برای رقیق سازی استفاده می شود بسیار مهم است. بسیاری از محلول ها در آب مقطر محلول هستند ، اما همیشه اینطور نیست. اگر در حال رقیق کردن باکتری ها یا سلول های دیگر هستید ، این کار را روی یک محیط کشت انجام دهید. مایعی که انتخاب می کنید برای همه رقیق سازی های زنجیره ای استفاده می شود.
اگر در مورد استفاده از محلول رقیق کننده شک دارید ، به دنبال کمک باشید یا به صورت آنلاین مراجعه کنید. به دنبال نمونه هایی از دیگران باشید که رقیق سازی زنجیره ای مشابه انجام داده اند
مرحله 2. تعدادی لوله آزمایش حاوی 9 میلی لیتر رقیق کننده آماده کنید
لوله های آزمایش برای رقیق سازی خالی استفاده می شود. ابتدا نمونه رقیق نشده را در اولین لوله قرار دهید ، سپس رقیق سازی ها را پی در پی در لوله های بعدی انجام دهید.
- قبل از شروع رقت ، تمام لوله های مورد استفاده را برچسب گذاری کنید تا وقتی آزمایش در حال اجرا است دچار سردرگمی نشوید.
- هر لوله با 10 رقیق پر می شود ، شروع از لوله ای که ماده آن رقیق نشده است. رقت در لوله اول 1:10 است ، سپس در لوله دوم 1: 100 ، در لوله سوم 1: 1000 و غیره. مقدار رقیق سازی که باید از قبل انجام شود را تعیین کنید تا محلول رقیق کننده را هدر ندهید.
مرحله 3. یک لوله آزمایش حاوی حداقل 2 میلی لیتر محلول رقیق نشده آماده کنید
حداقل مقدار محلول مورد نیاز برای انجام این رقت زنجیره ای 1 میلی لیتر است. اگر فقط از 1 میلی لیتر استفاده کنید ، محلول رقیق نشده باقی نمی ماند. برای محلولهای رقیق نشده BLM را برچسب گذاری کنید.
قبل از شروع هرگونه رقیق سازی محلول را کاملاً مخلوط کنید
مرحله 4. اولین رقیق سازی را انجام دهید
1 میلی لیتر محلول رقیق نشده را از لوله آزمایش BLM با یک پیپت برداشته و داخل لوله آزمایشی با برچسب 1:10 حاوی 9 میلی لیتر رقیق کننده قرار دهید ، سپس کاملاً مخلوط کنید. در حال حاضر 1 میلی لیتر محلول رقیق نشده در 9 میلی لیتر رقیق کننده وجود دارد. بنابراین ، محلول با ضریب رقت 10 رقیق شده است.
مرحله 5. رقیق سازی دوم را انجام دهید
برای رقیق سازی دوم ، 1 میلی لیتر محلول را از لوله 1:10 بردارید ، سپس آن را در لوله 1: 100 که حاوی 9 میلی لیتر رقیق کننده است ، قرار دهید. قبل از افزودن محلول به لوله بعدی مطمئن شوید که محلول در لوله 1:10 کاملاً مخلوط شده است. مجدداً اطمینان حاصل کنید که رقت در لوله 1: 100 کاملاً مخلوط شده است. محلول لوله 1:10 در لوله 1: 100 10 برابر رقیق شد.
مرحله 6. این روش را برای انجام رقت های زنجیره ای طولانی تر ادامه دهید
این فرایند را می توان هر چند بار که لازم است برای بدست آوردن غلظت محلول مورد نظر تکرار کرد. در آزمایشات با استفاده از منحنی های غلظت ، می توانید رقتهای زنجیره ای را برای تولید تعدادی محلول با رقتهای 1 ، 1:10 ، 1: 100 ، 1: 1000 انجام دهید.
روش 2 از 2: محاسبه ضریب رقت و غلظت نهایی
مرحله 1. نسبت آخرین رقت در رقت زنجیره ای را محاسبه کنید
نسبت رقت کل را می توان با ضرب ضریب رقت از هر مرحله به مرحله نهایی تعیین کرد. تصویر ریاضی با فرمول D استt = D1 x D2 x D3 x… x D ، دیt کل ضریب رقت و D است نسبت رقیق کننده است.
- به عنوان مثال ، فرض کنید شما 4 بار رقت 1:10 را انجام می دهید. عامل رقیق کننده را به فرمول وصل کنید: Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
- ضریب رقیق کننده در لوله چهارم در این رقت زنجیره ای 1: 10000 است. غلظت ماده پس از رقیق شدن 10000 بار کمتر از قبل از رقیق شدن آن است.
مرحله 2. غلظت محلول را پس از رقیق سازی تعیین کنید
برای تعیین غلظت نهایی محلول پس از رقت زنجیره ای ، باید غلظت اولیه آن را بدانید. فرمول C استپایان = جآغاز/D ، Cپایان غلظت نهایی محلول رقیق شده ، C استآغاز غلظت اولیه محلول اصلی است و D نسبت رقت از پیش تعیین شده است.
- به عنوان مثال: اگر با محلول سلولی که غلظت آن 1،000،000 سلول در میلی لیتر و نسبت رقیق سازی آن 1000 است ، شروع کنید ، غلظت نهایی نمونه رقیق شده چقدر است؟
-
با استفاده از فرمول:
- جپایان = جآغاز/D
- جپایان = 1.000.000/1.000
- جپایان = 1000 سلول در میلی لیتر
مرحله 3. مطمئن شوید که همه واحدها یکسان هستند
هنگام انجام هر محاسبه ، مطمئن شوید که واحدها همیشه در پایان محاسبه یکسان هستند. اگر واحد اولیه سلول در میلی لیتر است ، مطمئن شوید که واحدها در پایان محاسبه یکسان بمانند. اگر غلظت اولیه قطعات در میلیون (bpd) باشد ، غلظت نهایی نیز باید در واحد bpj باشد.
